Índice:

Como você escolhe clones?
Como você escolhe clones?

Vídeo: Como você escolhe clones?

Vídeo: Como você escolhe clones?
Vídeo: Escolha a sua Pérola! | Steven Universo | Cartoon Network 2024, Novembro
Anonim

Quando escolhendo uma clone , certifique-se de que as raízes são fortes, brancas e projetando-se avidamente do meio de cultivo. Se as raízes estiverem marrons e enrugadas, ou parecerem inativas, coloque-o de volta no lugar e procure um melhor.

Além disso, como você clona uma única célula?

  1. Conte as células para colocar ~ 16.000 células no primeiro poço (A1) de uma placa de 96 poços contendo 200 µL de meio.
  2. Remova 100 µL das células contendo A1 e misture com B1, pipetando para cima e para baixo 3x para misturar bem antes de remover 100 µL e misturar com C1, etc.

Além disso, como você escolhe uma colônia de células de mamíferos? Coloque a placa sob o microscópio para selecionar saudáveis indiferenciadas colônias . Escolha colônias usando uma pipeta P-20 definida para 10ul. Cuidadosamente escolha uma colônia sem quebrar o colônia em solteiro células e transfira para uma placa de 96 poços com tripsina. Pipete para cima e para baixo algumas vezes para dispersar o colônia.

Da mesma forma, como você usa um cilindro clone?

Usando fórceps médio estéril, pegue um cilindro de clonagem . Pressione suavemente a parte inferior plana do cilindro na graxa de silicone lisa e remova com um movimento vertical repentino. Se feito corretamente, isso dará uma distribuição uniforme de graxa na parte inferior do cilindro . Colocou o cilindro sobre uma colônia.

Como você escolhe colônias para linhas de células estáveis?

O protocolo para gerar linhas celulares estáveis requer várias etapas, conforme mostrado abaixo:

  1. Gere uma curva de morte para determinar a concentração de antibiótico de seleção ideal.
  2. Transfectar células com construto (s) de plasmídeo desejado
  3. Selecione e expanda colônias policlonais estáveis.
  4. Identifique clones únicos por diluição e expansão limitadas.

Recomendado: