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Vídeo: Como você escolhe clones?
2024 Autor: Stanley Ellington | [email protected]. Última modificação: 2023-12-16 00:22
Quando escolhendo uma clone , certifique-se de que as raízes são fortes, brancas e projetando-se avidamente do meio de cultivo. Se as raízes estiverem marrons e enrugadas, ou parecerem inativas, coloque-o de volta no lugar e procure um melhor.
Além disso, como você clona uma única célula?
- Conte as células para colocar ~ 16.000 células no primeiro poço (A1) de uma placa de 96 poços contendo 200 µL de meio.
- Remova 100 µL das células contendo A1 e misture com B1, pipetando para cima e para baixo 3x para misturar bem antes de remover 100 µL e misturar com C1, etc.
Além disso, como você escolhe uma colônia de células de mamíferos? Coloque a placa sob o microscópio para selecionar saudáveis indiferenciadas colônias . Escolha colônias usando uma pipeta P-20 definida para 10ul. Cuidadosamente escolha uma colônia sem quebrar o colônia em solteiro células e transfira para uma placa de 96 poços com tripsina. Pipete para cima e para baixo algumas vezes para dispersar o colônia.
Da mesma forma, como você usa um cilindro clone?
Usando fórceps médio estéril, pegue um cilindro de clonagem . Pressione suavemente a parte inferior plana do cilindro na graxa de silicone lisa e remova com um movimento vertical repentino. Se feito corretamente, isso dará uma distribuição uniforme de graxa na parte inferior do cilindro . Colocou o cilindro sobre uma colônia.
Como você escolhe colônias para linhas de células estáveis?
O protocolo para gerar linhas celulares estáveis requer várias etapas, conforme mostrado abaixo:
- Gere uma curva de morte para determinar a concentração de antibiótico de seleção ideal.
- Transfectar células com construto (s) de plasmídeo desejado
- Selecione e expanda colônias policlonais estáveis.
- Identifique clones únicos por diluição e expansão limitadas.
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