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Vídeo: Por que é necessário purificar os produtos de PCR antes do sequenciamento?
2024 Autor: Stanley Ellington | [email protected]. Última modificação: 2023-12-16 00:22
Verificação do desejado produtos é essencial , que inclui a confirmação da falta de dados não específicos produtos e dímeros de primer. Limpar -up da mistura de reação também é necessário para remover primers não incorporados e dNTPs que podem interferir nas reações subsequentes e levar a uma sequência ilegível.
Além disso, por que é necessário purificar os produtos de PCR?
Você precisa purificar produtos de PCR para se livrar de primers, nucleotídeos e enzimas não utilizados, a fim de otimizar o sucesso da ligação, que irá manter e sequenciar o produtos do PCR . Para purificar a Produtos de PCR , é usada cromatografia de exclusão de tamanho.
Também se pode perguntar: você deve purificar os produtos de PCR antes da digestão com endonuclease de restrição? A maioria de restrição enzimas são ativas em PCR buffers. Para aplicativos de clonagem, purificação do Produtos de PCR antes da digestão é necessário para remover a polimerase de DNA termofílica ativa presente no PCR mistura. As polimerases de DNA podem alterar as extremidades do DNA clivado e reduzir o rendimento da ligação.
As pessoas também perguntam: como você prepara produtos de PCR para sequenciamento?
Sequenciamento direto de produtos de PCR
- Certifique-se de ter amplificado o fragmento certo.
- Você deve remover todos os primers de PCR residuais e nucleotídeos não incorporados.
- Se os primers de PCR também forem os primers de sequenciamento, certifique-se de que correspondem às nossas condições.
- Não concentre demais a amostra!
Você pode sequenciar o produto de PCR?
Direto Sequenciamento do Produtos PCR . Sequenciamento usa apenas 1 primer em vez dos dois usados em PCR . Se você fizer não remova ambos os primers, você irá pegue dois sequências sobrepostos uns aos outros que não são legíveis. É normal usar um PCR primer para sequenciamento desde que corresponda às nossas condições.
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