Qual é o propósito de usar ddNTPs?
Qual é o propósito de usar ddNTPs?

Vídeo: Qual é o propósito de usar ddNTPs?

Vídeo: Qual é o propósito de usar ddNTPs?
Vídeo: 7.1 Sanger Sequencing using Dideoxyribonucleic Acid Nucleotides (ddNTPs) 2024, Novembro
Anonim

DdNTP refere-se a Dideoxinucleotídeos trifosfatos que são usados no método didesoxi de Sanger para produzir diferentes comprimentos de fitas de DNA para sequenciamento de DNA. Isso resulta no término do processo de polimerização do DNA (ou alongamento do DNA) porque esse processo precisa de um grupo 3'-OH para continuar.

Portanto, por que os ddNTPs são usados no sequenciamento?

Dideoxinucleotídeos são inibidores de alongamento de cadeia da DNA polimerase, usado no método Sanger para DNA sequenciamento . Os didesoxirribonucleotídeos não têm um grupo hidroxila 3 ', portanto, nenhum alongamento adicional da cadeia pode ocorrer uma vez que este didesoxinucleotídeo esteja na cadeia. Isso pode levar ao término do DNA seqüência.

Da mesma forma, os ddNTPs se anexam aos dNTPs? Um ou mais dos dNTPs são marcados radioativamente para ajudar a visualizar os produtos de replicação. Finalmente, cada tubo recebe um dos quatro nucleotídeos especiais chamados didesoxinucleotídeos ( ddNTPs ) No entanto, uma vez incorporada, a DNA polimerase não pode estender mais a cadeia porque precisa de um 3'-OH para anexar para o próximo nucleotídeo.

Da mesma forma, pode-se perguntar: como os ddNTPs interrompem uma reação de sequenciamento?

Quando presente em pequenas quantidades em reações de sequenciamento , trifosfatos de didesoxirribonucleosídeo ( ddNTPs ) encerrar o reação de sequenciamento em posições diferentes nas fitas de DNA em crescimento. ddNTPs param uma reação de sequenciamento porque eles: fazem com que a DNA polimerase caia da fita modelo. c.

Qual técnica envolvendo Dideoxinucleotídeos poderia ser usada?

O sequenciamento de Sanger é um método de sequenciamento de DNA com base na incorporação seletiva de terminação de cadeia didesoxinucleotídeos por DNA polimerase durante a replicação de DNA in vitro. Desenvolvido por Frederick Sanger e colegas em 1977, foi o mais amplamente usado sequenciamento método por aproximadamente 40 anos.

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